預混合飼料中維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E的測定——高效液相色譜法

                                  本方法適用于配合飼料、濃縮飼料、復合預混料飼料、維生素預混合飼料維生素A及維生素D、維生素E的測定。參考標準GB/T17817-2010《飼料中維生素A的測定高效液相色譜法》、 GB/T 17818-2010 《飼料中維生素D3的測定高效液相色譜法》、GB/T 17812-2008 《飼料中維生素E的測定高效液相色譜法》。

                                   

                                  1、方法原理    

                                  維生素預混料中的維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)用甲醇溶液提取,試液注入高效液相色譜柱,用紫外檢測器在275 nm處測定,外標法計算維生素A、維生素D3、維生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)含量。

                                   

                                  2、主要儀器設備

                                      1)高效液相色譜儀L210,帶紫外檢測器(上海儀電分析儀器有限公司);

                                      2)超聲波水??;

                                      3)電子天平;

                                      4)真空抽濾裝置。

                                   

                                  3、實驗方法

                                  1、混合標樣配置

                                  維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)標準貯備液:準確稱取維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E (dl-α-生育酚乙酸酯)各10.0 mg,置于100 mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋到刻度,混勻,4℃下保存。該貯備液濃度為0.1 mg/mL。

                                  維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)混合標準工作液:準確吸取各標準貯備液若干毫升于10 mL棕色容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,混勻。

                                  2、試樣溶液的制備

                                  稱取試樣1.00 g置于100 mL棕色容量瓶中,加入約80 mL甲醇,于 65 ℃超聲波水浴中超聲提取30 min,冷卻至室溫,用甲醇稀釋至刻度,充分搖勻后過0.45 μm濾膜過濾。將試樣溶液進一步稀釋至合適濃度,用于實驗分析。

                                  3、高效液相色譜儀參考條件

                                  色譜柱:C18 4.6 mm(i.d)×150mm;

                                  流動相:95%甲醇

                                  流速:1 mL/min;

                                  柱溫:室溫

                                  波長:275 nm;

                                  測定:取相同體積試樣制備液和標準使用液分別注入高效液相色譜儀,根據保留時間按定性,外標峰面積法定量。

                                   

                                  4、實驗結果

                                  4.1 混合標準溶液高效液相色譜圖

                                   

                                  1.維生素A乙酸酯   2.維生素D3   3.維生素E

                                   

                                  4.2工作曲線的繪制

                                          維生素A乙酸酯工作曲線見下圖,線性相關系數:0.9998

                                  維生素D3工作曲線見下圖,線性相關系數:0.9998

                                  維生素E工作曲線見下圖,線性相關系數:0.9992

                                  4.3預混料實際樣品色譜圖

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